細(xì)胞計(jì)數(shù)儀實(shí)操干貨：樣本制備、校準(zhǔn)步驟與常見(jiàn)故障排除，新手也能上手

日期：2025-10-21瀏覽：333次

　　細(xì)胞計(jì)數(shù)是生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷中的重要環(huán)節(jié)，而細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的出現(xiàn)極大地簡(jiǎn)化了這一過(guò)程。然而，對(duì)于新手來(lái)說(shuō)，如何正確操作細(xì)胞計(jì)數(shù)儀、制備合適的樣本以及解決常見(jiàn)問(wèn)題，仍然是一個(gè)挑戰(zhàn)。本文將詳細(xì)介紹它的實(shí)操技巧，包括樣本制備、校準(zhǔn)步驟以及常見(jiàn)故障排除，幫助新手快速上手并掌握這門技術(shù)。

　　一、樣本制備

　?。ㄒ唬┘?xì)胞收集

　　樣本制備是細(xì)胞計(jì)數(shù)的第一步，而細(xì)胞收集則是關(guān)鍵環(huán)節(jié)。對(duì)于貼壁細(xì)胞，通常需要使用胰蛋白酶進(jìn)行消化，使其從培養(yǎng)皿表面脫落。在消化過(guò)程中，要密切觀察細(xì)胞的形態(tài)變化，避免過(guò)度消化導(dǎo)致細(xì)胞損傷。當(dāng)細(xì)胞開(kāi)始脫落時(shí)，輕輕敲擊培養(yǎng)皿，使細(xì)胞脫落，然后加入適量的培養(yǎng)基終止消化。對(duì)于懸浮細(xì)胞，可以直接收集培養(yǎng)液中的細(xì)胞，但要注意避免雜質(zhì)的混入。

　?。ǘ┘?xì)胞懸浮

　　收集到的細(xì)胞需要制備成均勻的細(xì)胞懸浮液，以便進(jìn)行準(zhǔn)確計(jì)數(shù)。將收集到的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到離心管中，以適當(dāng)?shù)乃俣入x心（通常為 1000 - 1500rpm，3 - 5 分鐘），去除上清液后，用適量的生理鹽水或培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞。在重懸過(guò)程中，要避免產(chǎn)生氣泡，以免影響細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。如果細(xì)胞濃度過(guò)高，可以適當(dāng)稀釋；如果濃度過(guò)低，則需要重新收集細(xì)胞。

　?。ㄈ┘?xì)胞染色

　　為了更準(zhǔn)確地計(jì)數(shù)活細(xì)胞和死細(xì)胞，通常需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色。常用的染色方法有臺(tái)盼藍(lán)染色法和熒光染色法。臺(tái)盼藍(lán)染色法是基于細(xì)胞膜的完整性，活細(xì)胞排斥臺(tái)盼藍(lán)，而死細(xì)胞會(huì)吸收染料呈現(xiàn)藍(lán)色。在染色時(shí)，將細(xì)胞懸浮液與臺(tái)盼藍(lán)染液按一定比例混合（通常為 1:1），輕輕混勻后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)。熒光染色法則需要使用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察，通過(guò)熒光染料標(biāo)記細(xì)胞的特定成分，區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞。

　　二、校準(zhǔn)步驟

　?。ㄒ唬╅_(kāi)機(jī)預(yù)熱

　　在使用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀之前，需要先進(jìn)行開(kāi)機(jī)預(yù)熱。預(yù)熱時(shí)間一般為 15 - 30 分鐘，具體時(shí)間可以根據(jù)儀器的說(shuō)明書進(jìn)行調(diào)整。預(yù)熱的目的是讓儀器的光學(xué)系統(tǒng)和電子元件達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)，從而提高計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。

　?。ǘ┬?zhǔn)液準(zhǔn)備

　　校準(zhǔn)液是用于校準(zhǔn)細(xì)胞儀的標(biāo)準(zhǔn)溶液，通常由儀器制造商提供。校準(zhǔn)液中含有已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)微粒，這些微粒的大小和形狀與細(xì)胞相似，可以模擬細(xì)胞的光學(xué)特性。在進(jìn)行校準(zhǔn)之前，要確保校準(zhǔn)液保存良好，無(wú)沉淀、渾濁或變質(zhì)現(xiàn)象。

　?。ㄈ┬?zhǔn)操作

　　將校準(zhǔn)液按照說(shuō)明書的要求加入計(jì)數(shù)池中，然后啟動(dòng)儀器的校準(zhǔn)程序。儀器會(huì)自動(dòng)檢測(cè)校準(zhǔn)液中的微粒濃度，并與預(yù)設(shè)的標(biāo)準(zhǔn)值進(jìn)行比較。如果檢測(cè)值與標(biāo)準(zhǔn)值一致，說(shuō)明儀器處于良好的工作狀態(tài)；如果檢測(cè)值與標(biāo)準(zhǔn)值存在偏差，儀器會(huì)提示需要進(jìn)行校準(zhǔn)調(diào)整。根據(jù)儀器的提示，進(jìn)行相應(yīng)的校準(zhǔn)操作，直到檢測(cè)值與標(biāo)準(zhǔn)值一致為止。

　　三、常見(jiàn)故障排除

　?。ㄒ唬┯?jì)數(shù)不準(zhǔn)確

　　計(jì)數(shù)不準(zhǔn)確是細(xì)胞計(jì)數(shù)儀常見(jiàn)的問(wèn)題之一，可能由多種原因引起。首先，要檢查樣本制備是否符合要求，細(xì)胞懸浮液是否均勻、是否存在氣泡或雜質(zhì)。如果樣本制備不當(dāng)，需要重新制備樣本。其次，要檢查儀器的校準(zhǔn)狀態(tài)，確保儀器已經(jīng)正確校準(zhǔn)。如果儀器未校準(zhǔn)或校準(zhǔn)液過(guò)期，需要重新進(jìn)行校準(zhǔn)。此外，要檢查計(jì)數(shù)池是否清潔，是否有殘留的細(xì)胞或雜質(zhì)。如果計(jì)數(shù)池不清潔，會(huì)影響計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性，需要使用專用的清潔液進(jìn)行清洗。

　?。ǘ﹥x器無(wú)法啟動(dòng)

　　如果細(xì)胞儀無(wú)法啟動(dòng)，首先要檢查電源連接是否正常，確保儀器已經(jīng)正確連接到電源插座上。如果電源連接正常，但儀器仍然無(wú)法啟動(dòng)，可能是儀器內(nèi)部的保險(xiǎn)絲熔斷或電源模塊故障。在這種情況下，需要聯(lián)系儀器制造商的技術(shù)支持人員進(jìn)行維修。

　　（三）數(shù)據(jù)傳輸問(wèn)題

　　在使用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀時(shí)，數(shù)據(jù)傳輸是常見(jiàn)的問(wèn)題之一。如果儀器無(wú)法將數(shù)據(jù)傳輸?shù)诫娔X或其他設(shè)備上，首先要檢查數(shù)據(jù)傳輸線是否連接正確，確保傳輸線沒(méi)有損壞或松動(dòng)。如果傳輸線連接正常，但數(shù)據(jù)仍然無(wú)法傳輸，可能是儀器的軟件設(shè)置問(wèn)題。檢查儀器的軟件設(shè)置，確保數(shù)據(jù)傳輸格式和參數(shù)與接收設(shè)備一致。如果問(wèn)題仍然存在，可以嘗試重新安裝儀器的驅(qū)動(dòng)程序或更新軟件版本。

　　四、總結(jié)

　　細(xì)胞計(jì)數(shù)儀是一種高效、準(zhǔn)確的細(xì)胞計(jì)數(shù)工具，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷。通過(guò)正確的樣本制備、校準(zhǔn)步驟和常見(jiàn)故障排除，新手也可以快速上手并掌握這門技術(shù)。在樣本制備過(guò)程中，要注意細(xì)胞收集、懸浮和染色的細(xì)節(jié)，確保樣本的質(zhì)量；在校準(zhǔn)過(guò)程中，要嚴(yán)格按照說(shuō)明書的要求進(jìn)行操作，確保儀器的準(zhǔn)確性；在使用過(guò)程中，要及時(shí)發(fā)現(xiàn)并解決常見(jiàn)故障，保障儀器的正常運(yùn)行。希望本文的實(shí)操干貨能夠幫助新手更好地使用細(xì)胞儀，提高工作效率和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。